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三價(jià)鐵離子等三價(jià)金屬離子，在硅膠基質(zhì)的色譜柱中極易死吸附，從而損壞色譜柱，在液相直接檢測中存在較大難度。 本方法研究三價(jià)鐵離子與EDTA形成紫外可見的強(qiáng)吸收絡(luò)合物，再通過Comixsil HAX色譜柱保留。通過對(duì)絡(luò)合物的定量從而定量三價(jià)鐵離子等三價(jià)金屬離子。 應(yīng)用一：三價(jià)鐵離子的檢測 方法A、三價(jià)鐵離子流動(dòng)相中與EDTA絡(luò)合
方法B、三價(jià)鐵離子在樣品配置過程中加EDTA進(jìn)行絡(luò)合，從而流動(dòng)相中不再添加EDTA （本案例來源于某客戶提供的保健品中亞鐵離子的檢測方案）
說明：在以上“方法A”中，絡(luò)合三價(jià)鐵離子的過程是在鐵離子接觸到流動(dòng)相時(shí)瞬時(shí)進(jìn)行的，從而絡(luò)合物在HAX色譜柱上保留，并通過UV可視從而檢測。在“方法B”中，案例的實(shí)際樣品是硫酸亞鐵，但是亞鐵的二價(jià)離子，在固體鹽溶解時(shí)，水中電離出的游離亞鐵離子，即氧化成三價(jià)鐵離子，實(shí)際檢測到的也是三價(jià)鐵離子的EDTA絡(luò)合物，而這個(gè)與“方法A”不同的地方在于，客戶不喜歡流動(dòng)相中加EDTA，所以是在樣品配置過程中，加入了EDTA，使樣品在進(jìn)樣前已經(jīng)絡(luò)合完畢。“方法A"中是梯度條件，”方法B“中是等度條件。單純的檢測，都可以用等度的方法進(jìn)行，更方便。 兩種方法都可以用于單獨(dú)檢測三價(jià)鐵離子或者二價(jià)鐵離子。在此，需認(rèn)識(shí)到，二價(jià)鐵離子無法與三價(jià)鐵離子分離的，因?yàn)槎r(jià)鐵離子實(shí)際就是氧化后的三價(jià)鐵離子。所以，關(guān)于能否分離二價(jià)與三價(jià)鐵離子的問題討論，在這個(gè)方法中，是不存在的。 應(yīng)用二：三價(jià)鉍離子的檢測 在前文三價(jià)鐵離子的基礎(chǔ)上。我們開發(fā)出三價(jià)金屬離子HPLC-UV檢測辦法。實(shí)際應(yīng)用中，遇到了三價(jià)鉍離子的殘留檢測的問題。按照同樣的思路，以下案例以EDTA與三價(jià)鉍離子絡(luò)合物狀態(tài)，一樣得以相似方法檢測。
方法C、三價(jià)鉍離子與流動(dòng)相中的EDTA絡(luò)合 （此案例來源于某客戶提供的藥物制劑中三價(jià)鉍離子的檢測方案）
總結(jié)： 綜上，方法A,B,C的關(guān)于三價(jià)鐵離子（二價(jià)鐵離子）與三價(jià)鉍離子，在藥物制劑，保健品，藥物殘留中的應(yīng)用。我們可以了解到，采用流動(dòng)相中加EDTA,或者樣品配置時(shí)加EDTA(可避免流動(dòng)相中加EDTA)，使三價(jià)金屬離子與EDTA絡(luò)合合，基于Comixsil HAX智能混合柱對(duì)此絡(luò)合物的保留，UV的可視化，可以用簡單的HPLC+UV的方法來檢測定三價(jià)離子（以上方法C中，客戶實(shí)際上也自行開發(fā)了樣品配置時(shí)加EDTA的方法）。同時(shí)，方法的實(shí)際優(yōu)化過程中，EDTA的濃度與甲酸銨的濃度，會(huì)影響金屬離子絡(luò)合物的保留，峰形以及UV響應(yīng)值。這些因素是需要根據(jù)不同實(shí)際樣品而進(jìn)行調(diào)整的。 小知識(shí)點(diǎn)：用過EDTA系統(tǒng)的清洗 在HPLC方法中，EDTA是能不使用則不使用的，然后它的特殊性，在一些傳統(tǒng)的老品種，老藥典方法中仍然存在。有很多關(guān)于用過EDTA的儀器，管路，如何清洗的問題。在此分享如下： 1.要使用EDTA時(shí)，管路盡可能用PEEK管； 2.懷疑或擔(dān)心EDTA殘留，要清洗儀器與金屬管路時(shí)，可以用100%的50mM CuSO4水溶液先沖洗管路1小時(shí)，再用0.2%-0.3%的硫酸水溶液清洗30分鐘，最后再用水清洗10分鐘左右即可。
文中所采用的色譜柱規(guī)格為客戶實(shí)際正好在使用的規(guī)格，而當(dāng)我們想開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí)，菲羅門推薦的首選用柱規(guī)格如下： 1.貨號(hào)：FMD-HAX3-YONU，描述：Comixsil HAX 3u 100*3.0mm 2.貨號(hào)：FMD-HAX3-EONU, 描述：Comixsil HAX 3u 100*4.6mm |
