牛奶中苯甲酸檢測的固相萃取方法

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測食品中苯甲酸含量。
該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

苯甲酸 (CAS:65-85-0)

三、應用范圍

本方法適用于食品中苯甲酸的檢測的 HPLC 檢測及確證。

四、參考標準

《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》
五、實驗材料

NuAnalytical PolyClean X-MAX 固相萃取柱 60mg/3mL。
六、實驗方法

1、 樣品待測溶液制備

準確稱取牛奶 10 g 于 50 mL 離心管中，加入 0.25 mol/L 的亞鐵氰化鉀溶液 2 mL，搖勻，再加入 1  mol/L 的乙酸鋅溶液 2  mL，搖勻，4000  r/min 離心 10  min。上清液待凈化。

2、活化

依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化

3、上樣和洗脫

在MAX 固相萃取柱上加入 5 mL 備用樣液，棄去流出液。
用3 mL 2%氨水水溶液（v/v）、 3mL 甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用 2 mL 5%甲酸甲醇溶液（v/v）洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速 1 mL/min）。

4、重新溶解

收集洗脫液，洗脫液過 0.45 μm 濾膜，供高效液相色譜測定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm,   5μm)

檢測器：Waters 2487 紫外雙波長檢測器；檢測波長：230nm

流動相：A 乙腈    B-磷酸鹽緩沖溶液（稱取磷酸二氫鉀 2.5g+磷酸氫二鉀 2.5g，加水 溶解定容到 1000mL）

洗脫方式：等度洗脫，A:B=10 : 90

流速：1.0 mL/min

柱溫：30  ℃

進樣量：20 μL

七、實驗結果

1、25 mg/kg 牛奶中苯甲酸的添加回收結果

表 1   牛奶中苯甲酸 25 mg/kg 添加回收結果