硫酸氨基葡萄糖含量測定的方法要點

App ID: FLM-T230008

硫酸氨基葡萄糖含量測定

方法：自定

色譜柱：Titank HILIC 5μ 250*4.6mm（貨號：FMG-5568-EONU)

流速：1.0 mL/min

柱溫：35℃

檢測器：UV 195nm

流動相: 乙腈-20mM 磷酸氫二鉀（pH7.5）=（70:30）

圖譜

方法說明：原方法使用氨基柱在該流動相下進行分析，但氨基柱普遍損耗都較大；上述方法改用 Titank HILIC

色譜柱替代原先的氨基柱，其分析效果也較好，該柱的穩定性及壽命均相對于氨基柱好。

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1. 試劑及設備
硫酸氨基葡萄糖試劑盒、離心機、比色皿、移液器、吸管、去離子水等。

2. 樣品制備
將待測樣品溶解在去離子水或緩沖液中。

3. 操作步驟
(1) 取一支試管，加入5μl待測樣品和1ml硫酸氨基葡萄糖試劑，混勻，室溫下靜置10分鐘，使產生的顏色穩定；
(2) 在比色皿中加入1ml去離子水，校零，記錄比色皿編號；
(3) 將試管離心，離心3000rpm，2分鐘；
(4) 用移液器取離心后上清樣液，吸至0.2mg/ml線，放入對應的比色皿中，注意避免氣泡；
(5) 使用比色鏡或分光光度計，在546nm（或者530nm）波長下讀取吸光度(A);
(6) 按照試劑盒附帶的說明書計算樣品中硫酸氨基葡萄糖的含量。

4. 注意事項
(1) 確保所有勾兌操作在10分鐘內完成；
(2) 離心后，只取上清液測定，避免樣品殘留；
(3) 操作過程中，禁止口試，嚴格遵守實驗室有關安全規定。