HPLC分析條件的篩選主要包括以下步驟：
1. 確定目標(biāo)化合物性質(zhì)。需要了解待分離雜質(zhì)的一些性質(zhì)，包括分子量、結(jié)構(gòu)式（主要看有哪種基團(tuán)）等，并預(yù)測(cè)該種物質(zhì)在哪種有機(jī)溶劑中易容。根據(jù)結(jié)構(gòu)式可以大致預(yù)測(cè)分子極性大小，同時(shí)也可以判斷該物質(zhì)是否容易水解。
2. 根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)，結(jié)合雜質(zhì)在各種常見(jiàn)洗脫溶劑中的溶解性，例如在甲醇、乙腈、正己烷中哪個(gè)比較易溶，從而選擇適合用于洗脫的有機(jī)流動(dòng)相，確定方法開發(fā)時(shí)是用正相色譜柱還是反向色譜柱。
3. 在總量為m樣品中加入質(zhì)量為mS的內(nèi)標(biāo)物S，然后根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的重量以及在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比求出某組分i的含量。這種方法不需所有組分都出峰，操作條件和進(jìn)樣量基本無(wú)影響。
以上步驟完成后，可以進(jìn)一步確定HPLC分析的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，包括流動(dòng)相的組成及其比例、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)等。以上條件可根據(jù)文獻(xiàn)資料了解或經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，若無(wú)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)可參考，可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選實(shí)驗(yàn)條件，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不斷優(yōu)化分析條件。同時(shí)注意內(nèi)標(biāo)物難找，需要穩(wěn)定無(wú)反應(yīng)、結(jié)構(gòu)性能相似、保留時(shí)間內(nèi)插并完全分離。
希望以上HPLC分析條件篩選的步驟對(duì)你有所幫助。
