嬰幼兒奶粉中核苷酸檢測(cè)方法推薦

以下方案都是成功的客戶端較好方案，因各種涉密性問(wèn)題，不便獲得圖譜，如果您使用后，可以公開(kāi)圖譜，也將獲得一份獎(jiǎng)勵(lì)！

方案一

樣品前處理凈化后，能照AOAC用Polyclean X-MAX 60mg/3ml.

HPLC測(cè)定：

色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）

流動(dòng)相：0.1 M KH2PO4溶液（用KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；甲醇為流動(dòng)相B

流速：0.5 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm

溫度：40℃

梯度： 

時(shí)間(分鐘)	流動(dòng)相A(%)	流動(dòng)相B(%)
0	100	0
5	100	0
14	90	10
15	80	20
35	80	20
36	100	0
50	100	0

 

 

 
方案二

不同的樣品凈化方法，采用反相SPE模式分離，與方案一中離子交換模式比較，對(duì)極性大的雜質(zhì)去除更好。

樣品制備：

精密稱取奶粉5.0 g，加適量溫水，超聲10 min使溶解，加10%醋酸溶液5 mL，搖勻，靜置，再加水定容至50 mL，搖勻，過(guò)濾，取上清液待用。

樣品凈化：

SPE小柱：Polyclean X-HLB 60mg/3mL（貨號(hào)：9B-P001-06030）

活化：甲醇 3 mL

平衡：水 3 mL

上樣：2 mL待凈化液

沖洗：20%甲醇/水溶液 3 mL

合并上樣流出液與沖洗流出液，再加水定容至5 mL，作為待測(cè)溶液。

HPLC測(cè)定：

色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）

流動(dòng)相：0.1 M K2HPO4溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；乙腈為流動(dòng)相B

流速：1 mL/min

進(jìn)樣體積：5 μL

檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm

溫度：常溫

梯度： 

時(shí)間(分鐘)	流動(dòng)相A(%)	流動(dòng)相B(%)
0	100	0
8	100	0
25	95	5
27	75	25
40	75	25

 

方案三

LC/MS測(cè)定：

色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）

流動(dòng)相：10 mM 乙酸銨，5 mM 碳酸氫銨（用乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；甲醇為流動(dòng)相B

流速：0.8 mL/min

檢測(cè)器：質(zhì)譜

梯度： 

時(shí)間(分鐘)	流動(dòng)相A(%)	流動(dòng)相B(%)
0.0	100	0
3.5	100	0
10.0	80	20
20.0	80	20
21.0	100	0
35.0	100	0

 

 

 

 

 

 

 

 

以上用柱，如果分離度太大想縮短時(shí)間，也可根據(jù)自身情況采用:

A. Titank C18 5u 150*4.6mm(貨號(hào)：FMF-5560-EONU);

B. Titank C18 5u 100*4.6mm(貨號(hào)：FMD-5560-EONU);